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1、发展简史

20世纪60年代末70年代初，人们致力于研究基因的体外分离技术。Khorana于1971年最早提出核酸体外扩增的设想。但是，当时的基因序列分析方法尚未成熟，对热具有较强稳定性的DNA聚合酶还未发现。1985年，美国科学家Kary Mullis发明了PCR技术，并在Science杂志上发表了关于PCR技术的第一篇学术论文。从此，PCR技术得到了生命科学界的普遍认同，Kary Mullis也因此而获得1993年的诺贝尔化学奖。1988年初，Keohanog通过对所使用的酶的改进，提高了扩增的真实性。尔后，Saiki等人又从生活在温泉中的水生嗜热杆菌内提取到一种耐热的DNA聚合酶，使得PCR技术的扩增效率大大提高。

2、技术原理

DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解链成单链，在DNA聚合酶与启动子的参与下，根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子挎贝。

在聚合酶链式反应实验中发现，DNA在高温时也可以发生变性解链，当温度降低后又可以复性成为双链。因此，通过温度变化控制DNA的变性和复性，并设计引物做启动子，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的体外复制。（ DNA高温变性低温复性）

发现耐热DNA聚合同酶#Taq酶对于PCR的应用有里程碑的意义，该酶可以耐受90℃以上的高温而不失活，不需要每个循环加酶，使PCR技术变得非常简捷、同时也大大降低了成本，PCR技术得以大量应用，并逐步应用于临床。

3、普通PCR反应流程

4、反应原理

5、PCR循环

6、与荧光定量PCR技术相比较主要缺点

1、发展简史

定义：在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号的变化，通过仪器软件实时检测PCR扩增反应中每一个循环扩增产物量的变化，通过Ct值和标准曲线实现对起始模板的定量分析。

2、荧光PCR检测分为两种方法：

荧光探针法和荧光染料法。

3、荧光探针法检测原理：

6、临床基因检测技术比较：

方法	原理	适用	优点	弱点	操作	准确性	市场应用
DNA芯片	PCR-芯片杂交	多位点	多基因，多为点同时	少数位点	步骤多，易污染	较高	临床使用
PCR-RFLP	PCR-酶切-电泳	SNP位点	无	多位点	步骤多，易污染	较高	逐步淘汰
Sanger测序	PCR-测序	SNP位点，缺失突变		时间长	步骤多	金标准	无注册证
PCR-荧光染料法	荧光PCR	单个基因	快速，简便	假阳性	简单一步	高	核酸检测
PCR-荧光探针法	Taqman	SNP，多态性	快速，简便	少数位点	简单一步	高	普及
液相芯片法	PCR-液相杂交	SNP, 多基因，多位点		易污染	步骤多	较高	非主流